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光照为化学反应提供能量,直接触发三类破坏性反应,也是所有光敏试剂失效的根本原因:
纯化学试剂 / 干粉类:对温度、湿度敏感,室温密封干燥储存可最大化延长有效期,超温、高湿是主要失效诱因;
这类条件对试剂有效期的影响较小,多为间接性,仅在极端情况下会加速失效,属于辅助管控因素:
储存过程中的无菌性是液态试剂的基础要求,一旦发生微生物污染,试剂会立即失效,无有效期可言,污染的发生多与储存条件不当、操作不规范相关,且在适宜温度(25~37℃)、高湿度环境中会快速滋生。
湿度主要针对干粉类试剂、固态化学试剂,密封则是保障所有试剂(干粉 / 液态)避免受潮、氧化、污染的基础,潮湿是干粉试剂的主要失效原因,对液态试剂的影响为间接性(如潮解导致环境微生物滋生,污染液态试剂)。
光照(尤其是紫外线、可见光)会提供化学反应能量,诱导光敏物质发生光解、氧化反应;而试剂与空气长期接触会导致氧化,二者常协同作用,主要影响含荧光基团、不饱和键、巯基的试剂,对纯化学干粉、非光敏试剂影响极小。
对于需冻存的试剂(-20℃/-80℃),反复冻融的危害远大于单次短期超温,核心原因是冻融过程中形成的冰晶会破坏蛋白 / 酶的空间结构,同时加速氧化反应,且损伤具有累积性,每一次冻融都会导致活性不可逆下降。
温度通过影响分子热运动、蛋白空间结构、化学反应速率,决定试剂的稳定性,高温是活性试剂的最大 “天敌”,低温储存也需避免过度冷冻导致的不可逆损伤,不同温度区间的具体影响如下:
胎牛血清(FBS):未开封 **-20℃冻存 **,有效期 2~3 年;解冻后4℃冷藏,开封后使用有效期1 个月,建议分装为 50mL / 瓶避免反复融冻;
储存温度:是最核心因素,高温会加速蛋白 / 酶类变性、化学组分分解(如生长因子 - 20℃储存 1 个月即降解,-80℃可存 3 个月);低温也可能导致部分试剂失效(如血清低温可逆沉淀,37℃溶解即可,非失效);