细胞培养的基本条件有哪些？

细胞培养的基本条件有哪些？

细胞培养是指在体外模拟体内环境，使细胞能够在无菌、适宜的温度、酸碱度和营养条件下生长和繁殖的技术。

1.无菌环境

无菌操作设施：细胞培养需要在无菌超净工作台或生物安全柜中进行操作。超净工作台通过高效过滤器过滤空气，提供一个局部无菌的工作环境。在使用前，需要开启紫外线灯照射 30 分钟左右进行消毒，并且用 70% 乙醇擦拭台面。生物安全柜除了提供无菌环境外，还能保护操作者和环境免受生物危害。

无菌试剂和耗材：细胞培养用到的培养基、血清、胰蛋白酶等试剂，以及培养瓶、移液管、枪头之类的耗材都必须是无菌的。培养基和试剂通常是经过高压蒸汽灭菌或者过滤除菌处理。耗材一般是无菌包装，使用时要注意避免污染。例如，打开无菌包装的培养瓶后，应尽快使用，不要长时间暴露在非无菌环境中。

2.合适的温度和气体环境

温度控制：大多数哺乳动物细胞培养的适宜温度是 37°C，这和人体的体温接近。细胞培养箱能够精准地控制温度，其内部有加热和温度监测装置。在培养过程中，要确保培养箱温度稳定，并且定期对培养箱的温度进行校准。

气体环境：细胞培养需要合适的气体环境，主要是氧气和二氧化碳。一般来说，空气中的氧气含量(约 21%)对于大多数细胞是合适的，但二氧化碳浓度需要维持在 5% 左右。二氧化碳的作用是维持培养基的酸碱度(pH)，它和培养基中的缓冲体系一起，使 pH 稳定在 7.2 - 7.4 之间。培养箱通常可以调节二氧化碳浓度，并且有气体循环系统，以保证箱内气体均匀分布。

3.营养物质

培养基成分：培养基是细胞生长的关键营养来源，主要包含碳水化合物(如葡萄糖)、氨基酸、维生素、无机盐等。例如，DMEM(Dulbecco's Modified Eagle Medium)和 RPMI - 1640 是常用的细胞培养基，它们能够提供细胞生长所需的基本营养成分。此外，培养基中还会添加一定比例的血清(如胎牛血清)，血清含有多种生长因子、激素、蛋白质等成分，能够促进细胞生长和增殖。

营养物质的补充和更换：随着细胞的生长和代谢，培养基中的营养物质会逐渐被消耗，代谢废物也会积累。因此，需要定期更换培养基，一般是每隔 2 - 3 天更换一次。在更换培养基时，要注意操作轻柔，避免损伤细胞。同时，根据细胞的生长状态和密度，可以适当补充营养物质，如添加额外的谷氨酰胺等氨基酸来满足细胞快速生长的需求。