如何预防细胞培养液受到微生物污染?

如何预防细胞培养液受到微生物污染?

预防细胞培养液受到微生物污染需要从多个方面严格把控，包括培养环境的清洁、培养液及相关耗材的处理、操作过程的规范等，具体如下：

1、培养环境管理

细胞培养室清洁消毒：定期使用合适的消毒剂，如 75% 酒精、含氯消毒剂等，对细胞培养室的地面、台面、墙壁等进行擦拭消毒。同时，可采用紫外线照射进行空气消毒，每次照射时间不少于 30 分钟，每周至少进行 2-3 次。

净化工作台维护：净化工作台是细胞培养的重要场所，应定期检查其滤网，一般每 3-6 个月更换一次，以保证空气的洁净度。每次使用前，需开启风机和紫外线灯进行消毒，使用后及时清理台面，保持整洁。

培养箱清洁：细胞培养箱是细胞生长的关键环境，容易滋生微生物。定期(一般每 1-2 周)用消毒溶液擦拭培养箱内部，包括箱壁、搁板等，同时定期更换培养箱内的水盘，并添加无菌水和适量的消毒剂，防止微生物滋生。

2、培养液及耗材处理

培养液配制与保存：配制培养液时，应使用无菌的超纯水和优质的培养基粉末，并严格按照说明书进行操作。配制好的培养液若不立即使用，需根据其特性在合适的温度下保存，如 2-8℃或 - 20℃以下。含血清的培养液要注意避免反复冻融，且保存时间不宜过长，开封后的培养液应尽快使用。

耗材灭菌：细胞培养中使用的各种耗材，如培养瓶、培养皿、吸管等，必须经过严格的灭菌处理。玻璃制品可采用干热灭菌，一般在 160-180℃下保持 2-3 小时;塑料制品多采用高压蒸汽灭菌，在 121℃、103.4kPa 下灭菌 15-20 分钟;对于一些不耐热的耗材，可采用射线灭菌或化学消毒剂浸泡消毒。

血清处理：血清是细胞培养液的重要成分，也是微生物污染的潜在来源。在使用前，应对血清进行热灭活处理，一般在 56℃水浴中保温 30 分钟，以灭活其中可能存在的补体和微生物。同时，购买血清时应选择质量可靠的产品，并注意保存条件和有效期。

3、操作规范执行

人员卫生：操作人员进入细胞培养室前，应更换无菌工作服、鞋套，佩戴口罩和帽子，并用肥皂和流动水洗手，再用 75% 酒精擦拭双手。操作过程中，应避免用手直接接触培养器皿和培养液，如需拿取，需用镊子或无菌手套。

无菌操作技术：在净化工作台内进行细胞培养操作时，要保持良好的无菌操作习惯。如在打开培养瓶或培养皿前，需用 75% 酒精擦拭瓶口或皿盖，并在酒精灯火焰附近进行操作。使用吸管时，应避免吸管头部接触非无菌物品，吸取不同液体时要更换吸管，防止交叉污染。

避免交叉污染：操作过程中，不同细胞系或不同批次的培养液应分开使用，避免共用同一瓶培养液，防止交叉污染。同时，在处理多种细胞时，要注意更换手套和器械，防止细胞间的交叉污染和微生物的传播。