如何判断细胞培养液是否受到微生物污染?

判断细胞培养液是否受到微生物污染，可以从外观、气味、细胞生长状况及专业检测等方面进行，具体方法如下：

1、外观观察

颜色变化：正常情况下，细胞培养液有特定的颜色，如 DMEM 培养液一般为红色，RPMI 1640 培养液通常为粉红色。若受到微生物污染，细菌或真菌的代谢产物可能会使培养液的 pH 值发生改变，进而导致颜色变化。例如，细菌大量繁殖产酸可能使培养液变酸，颜色变黄;而某些碱性代谢产物可能使培养液变碱，颜色变紫。

浑浊度：未污染的细胞培养液是澄清透明的。一旦受到微生物污染，微生物的大量增殖会使培养液出现浑浊现象。其中，细菌污染通常会使培养液呈现均匀的浑浊，而真菌污染可能会出现丝状、絮状或颗粒状的悬浮物。

沉淀形成：微生物污染可能会导致培养液中出现沉淀。细菌污染有时会形成一些细小的沉淀，而真菌污染可能会产生较大的菌丝体沉淀。

2、气味辨别

正常的细胞培养液一般无明显异味或仅有轻微的特殊气味。若受到微生物污染，微生物分解培养液中的成分会产生特殊气味。比如，细菌污染可能会产生腐臭味或酸臭味，真菌污染有时会有发霉的气味。

3、细胞生长状况观察

生长速度异常：如果细胞在正常培养条件下，生长速度明显减慢、停滞甚至死亡，可能是培养液受到了微生物污染。微生物会与细胞竞争营养物质，还可能产生毒素抑制细胞生长。

细胞形态改变：污染的微生物可能会分泌一些酶或毒素，影响细胞的形态。例如，细胞可能会出现变形、肿胀、皱缩、破裂等异常形态，细胞边缘可能变得不清晰，细胞内可能出现颗粒状物质或空泡。

出现异常物质：在显微镜下观察细胞时，除了观察细胞本身的形态和生长情况外，还需留意培养液中是否有异常物质。如发现有杆状、球状、螺旋状的细菌，或丝状、分支状的真菌菌丝，以及一些游动的微生物等，可确定培养液已被污染。

4、专业检测方法

微生物培养检测：可以取少量培养液接种到专门的微生物培养基上，如血琼脂平板、麦康凯琼脂平板等，根据不同微生物的生长需求，在合适的温度和环境下培养。若有细菌生长，平板上会出现菌落;若有真菌生长，可能会出现菌丝和孢子。

革兰氏染色：对疑似污染的培养液进行涂片，然后进行革兰氏染色。在显微镜下观察，若看到染成紫色的革兰氏阳性菌或染成红色的革兰氏阴性菌，即可判断存在细菌污染，并可初步确定细菌的类型。

支原体检测：由于支原体体积较小，常规显微镜难以观察到，可采用支原体检测试剂盒，如荧光定量 PCR 检测试剂盒，通过检测培养液中是否存在支原体的特定基因片段来判断是否受到支原体污染。