如何预防细胞培养液渗透压异常的发生?

如何预防细胞培养液渗透压异常的发生?

为了有效预防细胞培养液渗透压异常，可以从精准配置培养液、恰当选择培养器皿、规范进行细胞操作等方面着手，具体措施如下：

1、精确配制培养液

使用优质试剂：选用纯度高、质量可靠的试剂来配制培养液。劣质试剂可能含有杂质，会影响培养液中溶质的浓度，进而导致渗透压异常。例如，在配制 DMEM 培养液时，要使用符合细胞培养级别的葡萄糖、氨基酸、维生素等成分。

准确称量和计量：严格按照培养液配方的要求，使用高精度的天平、移液器等仪器进行溶质的称量和液体的量取。以配制 1L 含 10% 胎牛血清的 RPMI 1640 培养液为例，需准确称取适量的 RPMI 1640 粉末，精确量取 900mL 双蒸水和 100mL 胎牛血清，确保各成分的含量准确无误。

正确溶解和混合：在溶解溶质时，要按照一定的顺序和方法进行，确保溶质充分溶解并均匀混合。例如，先将粉末状的培养基溶解在部分水中，搅拌至完全溶解后，再加入其他成分，如血清、抗生素等，最后定容至所需体积。

2、定期检测和校准

渗透压检测：使用渗透压仪定期检测培养液的渗透压。一般来说，动物细胞培养液的渗透压通常在 260 - 320 mOsm/kg 之间，植物细胞培养液的渗透压则因植物种类而异。在细胞培养过程中，应每隔一定时间(如每周)对培养液进行渗透压检测，及时发现渗透压的变化。

仪器校准：对用于检测渗透压的仪器以及天平、移液器等计量器具进行定期校准，确保测量和量取的准确性。例如，渗透压仪应按照仪器制造商的建议，定期使用标准溶液进行校准;天平要定期进行砝码校准，移液器则需通过校准仪进行校准，以保证其测量精度。

3、优化培养条件

控制培养环境：保持培养箱内的温度、湿度和气体环境稳定。温度的波动可能影响溶质的溶解度和溶液的体积，进而影响渗透压。一般细胞培养箱的温度设置为 37℃，湿度保持在 95% 左右，气体环境为 5% CO₂和 95% 空气。

选择合适的培养器皿：不同材质和规格的培养器皿可能对培养液的渗透压产生影响。例如，某些塑料培养器皿可能会吸附培养液中的溶质，导致渗透压发生变化。因此，应选择质量稳定、对培养液成分吸附少的培养器皿，如经过特殊处理的细胞培养瓶或培养板。

4、规范细胞操作

避免污染：在细胞培养过程中，严格遵守无菌操作技术，防止微生物污染。微生物的生长和代谢会消耗培养液中的营养成分，同时可能产生一些代谢产物，从而改变培养液的渗透压。例如，细菌污染会消耗培养液中的糖分和氨基酸，产生酸性或碱性物质，影响培养液的渗透压和 pH 值。

合理更换培养液：根据细胞的生长状态和需求，定期更换培养液。但在更换培养液时，要注意操作的规范性，避免过度冲洗细胞或加入过多或过少的新鲜培养液。一般来说，贴壁细胞每 2 - 3 天更换一次培养液，悬浮细胞则根据细胞密度和培养液的颜色变化来决定更换时间。