如何预防细胞培养液中的细菌和真菌污染?

如何预防细胞培养液中的细菌和真菌污染?

预防细胞培养液中的细菌和真菌污染，需从环境、操作、试剂等多方面入手，严格遵循无菌操作规范，具体措施如下：

1、严格的环境控制：

保持培养室清洁干燥：定期使用紫外线灯消毒，照射时间不少于 30 分钟，消毒后注意通风。每日清洁地面，控制培养室温度在 20-25℃，湿度在 40%-60%，减少微生物滋生。

规范超净工作台使用：每次使用前检查风机和过滤器，提前开启运行 15-30 分钟。操作时动作轻柔规范，避免破坏气流平衡。

2、强化人员操作规范：

做好个人防护：实验人员进入培养室前，需更换专用实验服、帽子、口罩和手套，防止自身携带的微生物污染培养液。

严格无菌操作：吸取液体时采用正确手法，避免液体溅出或产生气泡，手部不直接接触培养容器内壁和培养液。定期进行无菌操作培训和考核，提升操作人员技能和意识。

确保器械无菌：移液器、试管等细胞培养器械，使用前需彻底清洗并高压灭菌。不耐高温的塑料耗材，可化学消毒后洗净晾干。一次性耗材选择合格产品，开封后尽快使用，使用后及时丢弃。

重视细胞样本处理：接收外部细胞样本时，要全面检测细菌、真菌、支原体等污染项目。若为自行分离培养的细胞，分离过程需严格无菌操作，使用消毒器械获取细胞，并放入含抗生素的培养液中初步培养。

3、加强培养基和血清管理：

培养基方面：选择信誉良好的供应商，确保培养基本身无菌。配制时严格按配方称量，使用超纯水溶解，在超净环境下分装并密封好，注明配制日期、成分和有效期等信息。

血清方面：挑选经过严格质量检测的优质血清，如胎牛血清。血清使用前一般需在 56℃水浴加热 30 分钟左右进行灭活处理，灭活后低温保存并尽快使用。

合理使用抗生素：可在培养基中加入青霉素 - 链霉素双抗，能有效抑制多数革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌的生长。预防霉菌污染可添加两性霉素或制霉菌素等。但长期使用抗生素可能导致细胞产生耐药性或出现其他不良反应，需谨慎使用。