预防细胞培养液污染，除了使用抗生素外，还有哪些方法?

预防细胞培养液污染，除了使用抗生素外，还有哪些方法?

除了使用抗生素外，预防细胞培养液污染的方法还包括严格消毒灭菌、规范实验操作、控制培养环境等，具体如下：

1、物品与试剂的消毒灭菌：

培养器皿消毒：细胞培养所用的培养瓶、培养皿、吸管等器皿，需彻底清洗后进行高压蒸汽灭菌，确保无微生物残留。玻璃器皿可干热灭菌，塑料器皿多采用辐射灭菌或化学消毒后洗净晾干。

培养液灭菌：配制好的培养液可通过过滤除菌，选用合适孔径的滤膜(如 0.22μm 或 0.45μm)，过滤过程应严格无菌操作。对于一些可耐高温的成分，也可采用高压蒸汽灭菌后再与其他成分混合。

其他物品消毒：胶塞、橡皮乳头等物品也需严格消毒，可采用高压灭菌或化学消毒法。二氧化碳培养箱要定期用 75% 酒精擦拭，再用紫外灯照射消毒，培养箱水槽中的水应使用高压灭菌后的超纯水，并定期更换。

2、规范实验操作：

严格遵守无菌操作规则：实验人员进入无菌室前，应更换专用实验服、口罩和手套，用肥皂洗手或用消毒剂浸泡双手。在超净工作台内操作时，动作要轻缓，避免引起空气流动过大，瓶口、吸管等无菌物品不能离开火焰周围的无菌区域，操作过程中尽量少说话，防止唾沫污染。

专管专用：吸取培养液、细胞悬液等液体时，应使用专用吸管，避免交叉使用。一旦吸管口接触到手或其他可能污染的物品，应立即丢弃。

及时密封瓶口：使用培养液前，不要过早开启瓶口，开瓶后应保持斜位，避免直立，不再使用时要立即封闭瓶口，培养的细胞在处理之前也不要过早暴露在空气中。

3、控制培养环境：

保持无菌室清洁：定期用新洁尔灭等消毒剂擦拭无菌室地面、墙壁和台面，定期进行甲醛熏蒸消毒。控制无菌室的温度、湿度和通风，减少灰尘和微生物的滋生。

确保超净工作台正常运行：按厂家规定定期清洗或更换超净台的空气滤网，定期检查超净台的空气净化标准，确保其内部处于无菌环境。

4、细胞与血清的处理：

细胞冻存与复苏：所有细胞一旦购置或建立，应及早留种冻存，低温保存于液氮中。若发生污染，可及时复苏早期冻存的细胞，重新培养。

血清处理：购入的未灭活血清可采取 56℃水浴加热 30 分钟进行灭活处理，以灭活可能存在的补体和某些微生物。同时，选择质量可靠的血清供应商，降低血清被污染的风险。

组织样本处理：进行原代培养时，取材过程要严格无菌操作，确保组织样本不被污染。取材前要用碘酒消毒，再用酒精彻底脱碘，避免碘对细胞产生毒性或影响。