如何正确进行细胞培养液的无菌操作?

如何正确进行细胞培养液的无菌操作?

正确进行细胞培养液的无菌操作，需从环境准备、个人防护、操作规范等多个方面入手，具体如下：

1、环境准备：

消毒灭菌：实验前，无菌室及无菌操作台需用紫外灯照射 30-60 分钟灭菌。超净工作台台面要用 70% 酒精擦拭，然后开启风机运转 10 分钟后，才可开始实验操作。

保持整洁：无菌操作工作区域应保持清洁与宽敞，仅将必要物品，如试管架、移液器等暂时放置，其它实验用品用完后应及时移出，以利气体流通。

2、个人防护：

规范着装：工作人员必须穿戴实验衣、手套，佩戴口罩，头发应束起，避免头发掉落污染。对于来自人源性或病毒感染的细胞株，应选择适当等级的无菌操作台，并严格遵守相应防护规定。

手部消毒：操作前要用 75% 酒精消毒手，实验过程中手触及可能污染的物品或出入培养室后，都要重新消毒。

3、操作规范：

物品处理：实验用品要用 70% 酒精擦拭后才能带入无菌操作台内。打开各类瓶盖前先过火，以固定灰尘;打开的瓶口、试管口要过火焰，镊子等器械使用前应经火焰烧灼，但要注意避免烧灼时间过长。

正确取用：小心取出无菌实验用品，避免污染，切勿碰触吸管与吸头头部或容器瓶口，不要在打开的容器正上方操作。容器打开后，用手夹住瓶盖并握住瓶身，倾斜约 45° 角取用，尽量勿将瓶盖盖口朝上放在台面上。

避免交叉污染：同一根吸管或滴管不应连续用于几个不同的细胞系;吸取培养基的吸管应离开培养瓶或试管口 0.5cm，避免伸入瓶口或试管口，以防细胞系互相混杂污染。

动作规范：操作时动作要准确敏捷，但不宜过快，以防空气流动增加污染机会。不能用手触及已消毒器皿，如已接触，要用火焰烧灼消毒或更换备品。

保持无菌区域：实验操作应在操作台中央无菌区域内进行，勿在边缘非无菌区域操作。工作中不能面向操作野讲话或咳嗽，以免唾沫污染。

后续处理：实验结束后，将实验物品带出工作台，若需继续进行下一个实验，要用 70% 酒精擦拭无菌操作台面，再让无菌操作台风机运转 10 分钟后，才可进行后续操作。