细胞培养液被污染后应该如何处理?

细胞培养液被污染后应该如何处理?

细胞培养液被污染后，可根据污染类型和细胞重要性采取不同处理方法，具体如下：

细菌污染：

轻度污染：若细胞较为珍贵，可先取少量培养液涂片染色检查，确定细菌种类。然后在培养基中添加抗生素，如青霉素和链霉素，或四环素、庆大霉素等，四环素和庆大霉素工作浓度一般为 50μg/mL，链霉素为 100μg/mL。也可联合应用抗菌药物，如西司他丁钠 - 亚胺培南复方制剂。加药后作用 24-48 小时，再换常规培养液。

重度污染：若细胞价值不高，应及时丢弃污染的细胞及培养液，避免污染扩散。同时，用 75% 酒精擦洗培养环境，必要时可用新洁尔灭二次清洁。

真菌污染：

污染初期：若在培养液中发现漂浮的菌丝，应迅速将污染的细胞培养液缓慢吸出，并用 Hanks 液清洗细胞和培养瓶壁 2 至 3 次。然后，加入含有抗生素的培养液(青霉素 100 单位 /mL、链霉素 100 单位 /mL、两性霉素 10mg/L)。24 小时后观察结果，若仍有菌丝存在，可重复清洗步骤 2 至 3 次。

污染严重：由于真菌孢子容易飘散，难以彻底清除，通常建议舍弃被污染的细胞及培养液。对培养箱等相关容器进行严格清洁和消毒，可用酒精彻底擦洗 CO₂孵箱，再用新洁尔灭擦洗一遍，水盘里加入饱和量的硫酸铜。

支原体污染：可使用支原体清除试剂，如 BM-Cyclin 或 Mycoplasma Removal Agent 等，按照说明书操作，处理过程中密切观察细胞状态。也可采用小鼠腹腔巨噬细胞清除法，将支原体污染的细胞注射入小鼠腹腔，24 或 48 小时后抽取腹水，离心收集细胞并在培养瓶中继续培养。此外，还可尝试用环丙沙星注射液，以 20μg/mL 浓度培养 2 代后改用 10μg/mL 浓度持续培养约 2 周。

病毒污染：由于彻底清除病毒污染通常非常困难，一般建议丢弃被污染的细胞。若细胞十分珍贵，可尝试将细胞置于高温环境(如 41℃)短时间处理，可能有助于减少病毒滴度，但同时也可能对细胞造成损伤。或者重新引入经过验证为高质量且无病毒污染的细胞株。

无论哪种污染，若细胞价值不高，最稳妥的方法是及时丢弃污染的细胞及培养液，防止污染扩散，并对培养环境、器皿等进行彻底消毒，如用 75% 酒精擦拭、紫外灯照射等。同时，要回顾操作流程，找出污染原因，避免再次发生污染。