细胞培养液被污染的原因有哪些?

细胞培养液被污染的原因有哪些?

细胞培养液被污染的原因主要有环境因素、操作不当、实验材料问题等，具体如下：

环境因素：

空气微生物：空气中含有大量微生物，若操作室与外界隔离不严或消毒不充分，微生物易进入。此外，净化工作台使用过久，滤板未定期更换，滤气受尘埃堵塞，或工作时未戴口罩、外界气流过强，都可能使污染空气进入操作区，导致污染。春夏季南方地区多雨，空气湿度大，含菌量多，更易发生污染。

培养箱污染：CO₂培养箱若不定期清洁，会成为微生物滋生的温床。例如培养箱内的水盘未及时更换水或清理，易滋生细菌和真菌，其孢子或菌体可随空气流动污染培养液。

操作不当：

未严格无菌操作：操作者未戴口罩、帽子，呼出气中可能排出细菌和支原体;培养瓶口未用 75% 酒精擦拭和烧灼;操作时吸管或无菌器具碰到污染物品，如手上皮肤、瓶子外壁等;操作时大声说话、来回走动扬起灰尘等，都可能引入污染物。

器材使用不当：器材和溶液使用前未仔细检查是否污染或是否已消毒灭菌，或虽经处理但时隔已久未重新处理，就可能将微生物带入培养液。

实验材料污染：

血清污染：市售血清若灭菌不彻底，可能存在潜在的病毒和支原体污染，进而导致细胞培养液污染。

培养基污染：培养基在配制过程中，若原料受污染、灭菌不彻底，或储存条件不当，都可能使培养基被微生物污染，使用后污染细胞培养液。

组织标本污染：进行原代细胞培养时，若动物组织标本取材过程中未严格无菌操作，或取材后未用抗生素洗液洗涤浸泡，组织本身携带的细菌等微生物会污染培养液。

设备污染：如移液器、冰箱、水浴锅等设备若未定期清洁和维护，内部可能残留微生物，在使用过程中污染实验材料，进而污染细胞培养液。