如何判断细胞培养液是否被污染?

判断细胞培养液是否被污染，可通过观察培养基外观与气味、细胞形态与生长情况，借助显微镜观察以及进行微生物检测等方法，具体如下：

观察培养基外观：正常培养基应是透明或轻微浑浊，无悬浮物。若培养液变得浑浊，可能是细菌污染;若出现絮状杂质或丝状漂浮物，多为真菌或霉菌污染;若有黄色、白色等颜色异常的斑点，可能是真菌菌落。

留意培养基气味：正常培养基无明显异味，而被污染的培养基可能会散发酸臭、霉味等特殊气味。

观察细胞形态：在倒置显微镜下，正常细胞形态规则，边界清晰。若细胞出现变形、聚集、有颗粒或空泡，形状不规则，或细胞裂解、从培养瓶壁脱落等，可能是培养液被污染所致。

关注细胞生长速度：细胞生长缓慢、停滞或增殖速度明显改变，如原本贴壁良好的细胞贴壁能力下降，或悬浮细胞出现大量死亡，可能是培养液受到污染，影响了细胞的正常生长环境。

显微镜观察微生物：借助倒置显微镜，先用低倍镜(10X)再用高倍镜(40X)观察。细菌通常呈球状、杆状或螺旋状，为黑色细沙状;真菌一般是丝状、管状或树枝状菌丝，酵母菌为卵圆形菌体;支原体在高倍镜下可见黑色物体蠕动;黑胶虫呈黑色颗粒状或片状，会进行 “布朗运动”。

检测 pH 值变化：正常情况下，培养基 pH 值稳定。若被细菌污染，细菌代谢产生酸性物质，会使培养基 pH 值下降，加了酚红的培养基会由红变黄。

微生物检测：可通过无菌检测，将少量培养液接种到无菌培养基上，观察是否有微生物生长;也可采用 PCR 检测，针对特定微生物的 DNA 进行扩增，判断是否存在相应污染微生物。