细胞培养液受到支原体污染时，有哪些预防措施?

细胞培养液受到支原体污染时，有哪些预防措施?

细胞培养液受到支原体污染时，可采取以下预防措施：

规范实验操作：始终穿戴手套和干净的实验服，且至少每周更换一次实验服。让细胞培养层流柜保持整洁，确保气流无阻。物品放入培养罩前需喷洒 70% 乙醇消毒，操作时要盖好平板和瓶子，避免在无盖器皿上方舞动手掌和手臂，若有溢出物应立即清理。

加强环境清洁：定期使用支原体清除喷雾进行空间消毒，也可用新洁尔灭擦洗无菌室或用甲醛熏蒸消毒。生物安全柜或超净工作台每次使用后要做好清洁，减少物品堆放，并定期消毒。在水浴锅和培养箱的水源中加入消毒试剂，如 Aquabator - Clean、Incuwater - Clean 等，同时保持培养箱洁净，每周更换或清洁一次接水盘。

确保器材无菌：选择易于清洁且可高压灭菌的移液器用于细胞培养工作，定期对其进行清洁和维护。使用带有防护包装的无菌滤芯吸头，防止支原体通过气溶胶传播。器材使用前应严格按照要求进行灭菌处理，确保无菌。

检测与隔离新细胞：新到的细胞和培养基应进行支原体污染检测，确认无污染后再使用。将新细胞系隔离在单独的培养箱中，直至明确其未受支原体污染，避免与其他细胞混合培养，防止交叉污染。

过滤培养试剂：对于不能高压灭菌的培养基和试剂，过滤时应使用 0.1μm 孔径的无菌过滤器，而非标准的 0.22μm 过滤器，以有效阻挡支原体。

合理使用抗生素：可在培养基中加入适量对支原体有效的抗生素，如卡那霉素(50μg/ml)等，也可使用专用的支原体清除剂，如在培养基中添加 Plasmocin™ prophylactic(工作浓度 5μg/ml)，但应注意避免长期使用产生耐药性。

建立细胞种子库：从可靠来源引进细胞，如 ATCC、基础医学细胞中心等。细胞购置或引入后，及早留种冻存，建立良好的种子库管理规章制度，并定期对种子库中的细胞进行支原体检测，确保有未受污染的细胞可随时复苏使用。