细胞培养液受到支原体污染后，有哪些处理方法?

细胞培养液受到支原体污染后，有哪些处理方法?

细胞培养液受到支原体污染后，可根据细胞的重要程度选择不同处理方法，对于珍贵细胞可采取药物处理、清洗纯化等方式挽救，对于非重要细胞可直接灭活丢弃。具体如下：

丢弃污染细胞：对于非重要、易培养的细胞，如常规实验中使用的普通细胞系，可将培养物与用过的培养基灭活后丢弃，以防止污染扩散。

使用支原体清除剂：可使用支原体清除剂(Mycoplasma Removal Agent)处理细胞，如 Plasmocin™ treatment，作用浓度为 25μg/ml，通常两周左右可以清除支原体。

清洗纯化法：通过细胞营养驯化、筛选优质细胞群，然后对细胞进行清洗，利用离心力、细胞与微生物质量和悬液的浮力差，反复离心洗涤细胞，可降低支原体数量。如结合敏感抗生素的抑杀作用，效果更好。

药物辅助加温处理：先用药物处理细胞，再将污染的组织培养物放在 41℃培养 18 小时，可杀死支原体，但此方法对细胞有一定不良影响，需谨慎使用。

使用特异性血清：用 5% 的兔支原体免疫血清处理污染的细胞培养液，特异抗体可抑制支原体生长，通常经抗血清处理后 11 天左右可转为阴性，并且 5 个月后仍可能保持阴性。

动物体内接种除菌法：把受支原体污染的细胞接种在同种动物皮下或腹腔中，借助动物免疫系统消灭支原体，而细胞能在体内继续生长。待一定时间后，从体内取出细胞再进行培养繁殖。

巨噬细胞吞噬法：从动物腹腔采取巨噬细胞并纯化，然后加入被支原体污染的细胞培养液中混合培养。培养过程中，可取出支持物逐日染色、镜检观察，以判断支原体是否被清除干净。

使用支原体清除培养基：每 2-3 天更换 1 次新鲜培养液，换液时用无菌的平衡盐溶液洗涤细胞 1-2 次。期间若细胞密度过大，需保持细胞密度适当，并更换新的培养器皿。处理 15 天后，可用支原体检测试剂盒进行检测，若仍有支原体残留，可考虑再处理 6 天。