预防细胞培养液支原体污染的措施有哪些?

预防细胞培养液支原体污染的措施有哪些?

预防细胞培养液支原体污染需要从多个方面入手，包括规范实验操作、加强环境清洁、把控试剂质量等。具体措施如下：

规范实验操作：始终穿戴手套和干净的实验服，且至少每周更换一次实验服。让细胞培养层流柜保持整洁，确保气流无阻。物品放入培养罩前需喷洒 70% 乙醇消毒，操作时要盖好平板和瓶子，避免在无盖器皿上方舞动手掌和手臂，若有溢出物应立即清理。

加强环境清洁：定期使用支原体清除喷雾，如 Mycoplasma - off™喷雾剂对实验室空间进行消毒，也可用新洁尔灭擦洗无菌室或用甲醛熏蒸消毒。生物安全柜或超净工作台每次使用后要做好清洁，减少物品堆放，并定期消毒。在水浴锅和培养箱的水源中加入消毒试剂，如 Water Shield™，同时保持培养箱洁净，每周更换或清洁一次接水盘。

确保器材无菌：选择易于清洁且可高压灭菌的移液器用于细胞培养工作，定期对其进行清洁和维护。使用带有防护包装的无菌滤芯吸头，防止支原体通过气溶胶传播。器材使用前应严格按照要求进行灭菌处理，确保无菌。

把控试剂质量：选择经严格支原体检测的胎牛血清，如 γ 射线灭菌处理的血清，每批次需检测精氨酸水解型和糖发酵型支原体。对于不能高压灭菌的培养基和试剂，过滤时应使用 0.1μm 孔径的无菌过滤器，而非标准的 0.22μm 过滤器，以有效阻挡支原体。

检测与隔离新细胞：所有新细胞株需在独立实验室隔离培养至少 2 周，期间通过 PCR 检测或荧光染色法筛查支原体，确认无污染后再转入主实验室。

合理使用抗生素：可在培养基中加入适量对支原体有效的抗生素，如卡那霉素(50μg/ml)等，也可使用专用的支原体清除剂，如 Zell Shield®，但应注意避免长期使用产生耐药性。

建立细胞种子库：从可靠来源引进细胞，如 ATCC、基础医学细胞中心等。细胞购置或引入后，及早留种冻存，建立良好的种子库管理规章制度，并定期对种子库中的细胞进行支原体检测，确保有未受污染的细胞可随时复苏使用。