如何有效预防细胞培养液中支原体的污染?

如何有效预防细胞培养液中支原体的污染?

预防细胞培养液中支原体污染，可从规范操作、把控源头、清洁环境等方面入手，具体措施如下：

规范实验操作：始终穿戴手套和干净的实验服，至少每周更换一次实验服。保持细胞培养层流柜整洁，物品放入前需喷洒 70% 乙醇消毒。操作时要盖好平板和瓶子，避免在无盖器皿上方舞动手掌和手臂，若有溢出物应立即清理。

把控细胞源头：从 ATCC、基础医学细胞中心等权威机构引进细胞，其严格的质量检测体系可降低初始污染风险。新细胞系需在独立培养箱中隔离培养，经支原体检测确认无污染后，再与其他细胞一同培养。

确保器材无菌：选择易于清洁且可高压灭菌的移液器，定期对其进行清洁和维护。使用带有防护包装的无菌滤芯吸头，防止支原体通过气溶胶传播。器材使用前应严格按照要求进行灭菌处理。

过滤培养试剂：对于不能高压灭菌的培养基和试剂，过滤时应使用 0.1μm 孔径的无菌过滤器，而非标准的 0.22μm 过滤器，以有效阻挡支原体。

清洁实验环境：定期使用支原体清除喷雾对实验室空间进行消毒，也可用新洁尔灭擦洗无菌室或用甲醛熏蒸消毒。生物安全柜或超净工作台每次使用后要做好清洁，减少物品堆放，并定期消毒。在水浴锅和培养箱的水源中加入消毒试剂，同时保持培养箱洁净，每周更换或清洁一次接水盘。

合理使用抗生素：可在培养基中加入适量对支原体有效的抗生素，如卡那霉素(50μg/ml)等，也可使用专用的支原体清除剂，但应注意避免长期使用产生耐药性。

定期检测筛查：定期对培养物进行支原体检测，可使用 PCR、荧光染色等方法，以便及早发现污染并采取措施，防止污染扩散。