预防细胞培养液中支原体污染的措施有哪些?

预防细胞培养液中支原体污染的措施有哪些?

预防细胞培养液中支原体污染，可从规范操作、控制环境、严格把控细胞与试剂质量等方面入手，具体措施如下：

规范实验操作：进入细胞间前，需在缓冲隔离间佩戴好口罩、防护服、鞋套等，操作时戴手套。工作开始要先用 75% 酒精消毒手部以及袖口、瓶口等。进行多种细胞培养操作时，所用器具要严格区分，换液或传代操作时，注射器和滴管不要触及细胞培养瓶瓶口。

控制实验环境：定期使用支原体清除喷雾对实验室空间进行消毒，生物安全柜或超净工作台也要定期消毒，每次使用后做好清洁，减少物品堆放。在水浴锅和培养箱的水源中加入消毒试剂，如 Aquabator - Clean、Incuwater - Clean 等。

把控细胞与试剂质量：选择经严格支原体检测的胎牛血清，每批次需检测精氨酸水解型和糖发酵型支原体。新传入的细胞株需在独立实验室隔离培养至少 2 周，通过 PCR 检测或荧光染色法筛查支原体，确认无污染后再转入主实验室。

确保器材无菌：选择易于清洁且可高压灭菌的移液器用于细胞培养工作，并针对定期的去除污染和维护作业制定相关指南和方案。使用带有防护包装的无菌滤芯吸头，防止支原体通过气溶胶传播。

合理使用抗生素：可在培养基中加入适量对支原体有效的抗生素，如卡那霉素(50μg/ml)等，也可使用专用的支原体清除剂，如在培养基中添加 Plasmocin™ prophylactic，工作浓度 5μg/ml，但应避免长期使用产生耐药性。

定期检测筛查：每月对连续传代细胞进行 PCR 检测，并抽查培养基样本。推荐定期使用荧光原位杂交定位细胞内寄生支原体，也可将直接培养法与 MycoAlert 发光法结合，覆盖可培养与不可培养支原体。