关键细节：排查 “隐性影响因素”

关键细节：排查 “隐性影响因素”

在确定大方向后，需关注培养液的细节参数，避免因 “小差异” 导致实验失败。

1. 血清的选择(含血清培养液)

血清是一把 “双刃剑”：提供生长因子，但成分不确定(批次差异)。需根据需求选择：

胎牛血清(FBS)：营养价值最高(含丰富促生长因子)，适用于大多数细胞(尤其是原代细胞、干细胞)，但成本高;需选择合格供应商(检测支原体、内毒素、病毒阴性)，且尽量固定批次(避免批次间差异导致细胞状态波动)。

犊牛血清(CS)/ 马血清(HS)：营养低于 FBS，成本较低，适用于部分耐受性强的细胞系(如 HeLa、Vero)。

血清浓度：常规为 5-10%，特殊细胞需调整(如干细胞可能需 20% FBS，分化实验可能需 0.5-2% FBS)。

2. 关键成分的适配性

葡萄糖浓度：

高糖 DMEM(4.5g/L)：适用于代谢旺盛、需快速增殖的细胞(如肿瘤细胞、成纤维细胞);

低糖 DMEM(1g/L)：适用于对葡萄糖敏感的细胞(如胰岛 β 细胞、部分神经细胞，避免高糖导致渗透压过高)。

缓冲系统：

常规用NaHCO₃-CO₂缓冲系统(需配合 5% CO₂培养箱，维持 pH 7.2-7.4);

若无法使用 CO₂培养箱(如部分野外实验)，选择添加HEPES(20-30mM)的培养液，HEPES 可在无 CO₂环境下稳定 pH。

特殊添加物：

谷氨酰胺：细胞合成核酸的必需成分，但易分解(4℃储存 1-2 周失效)，若培养液不含谷氨酰胺，需单独添加L - 谷氨酰胺溶液(终浓度 2mM);

非必需氨基酸(NEAA)：对部分细胞(如 CHO、杂交瘤)可促进生长，减少细胞凋亡，可按需添加(终浓度 1%)。

3. 污染与安全性

排查培养液的无菌性：购买时确认是否经过滤除菌(0.22μm 滤膜)，开封后避免污染(无菌操作);

控制内毒素：临床级实验(如细胞治疗)需选择内毒素 < 0.1EU/mL 的培养液，避免内毒素激活细胞(如免疫细胞);

支原体检测：支原体是细胞培养的 “隐形杀手”，优先选择经过支原体检测阴性的培养液，或在使用前用支原体检测试剂盒验证。