挽救过程中的关键注意事项

一、挽救过程中的关键注意事项

全程无菌操作，避免二次污染

所有操作(换液、传代、配培养基)均需在超净台内进行，操作前用 75% 酒精消毒双手、台面、培养瓶外壁;

使用一次性无菌枪头、离心管，避免交叉污染;污染细胞与未污染细胞需在不同超净台操作(或间隔 2 小时以上，期间彻底消毒超净台)。

避免抗生素滥用，防止耐药性

不建议长期(>3 代)使用抗生素，即使细菌未彻底清除，也需停药(长期使用会诱导细菌产生耐药基因，且可能影响细胞功能，如干扰蛋白合成、抑制细胞增殖);

若尝试 2 种以上抗生素组合仍无法清除细菌，直接丢弃细胞，避免耐药菌扩散。

及时留存细胞备份(若条件允许)

在挽救第 1 代成功后(细菌数量明显减少，细胞状态稳定)，可冻存少量细胞(用含 10% DMSO 的冻存液，按常规冻存流程保存于 - 80℃或液氮)，作为 “备用样本”，避免后续挽救失败导致细胞彻底丢失。

监测细胞功能(挽救成功后)

挽救后的细胞需验证功能是否正常(如贴壁细胞的贴壁能力、悬浮细胞的增殖速率、特定细胞的分化能力或蛋白表达水平)，避免细菌毒素或抗生素对细胞功能造成隐性损伤，影响后续实验结果。

二、不建议挽救的情况(直接丢弃，优先保护环境)

常规细胞系污染(如 HeLa、HEK293、CHO)：重新复苏冻存的细胞更高效，挽救成本(时间、试剂、人力)高于重新培养，且易导致污染扩散至其他细胞。

重度污染(细胞大部分死亡，细菌满视野)：细菌代谢产生的毒素已严重破坏细胞内环境，即使清除细菌，细胞也无法恢复正常形态和功能，后续实验结果不可靠。

抗生素毒性明显：预实验中发现目标细胞对推荐抗生素敏感(如 24 小时内细胞大量死亡、形态皱缩)，无安全浓度可用，强行挽救会导致细胞彻底丢失。