细胞培养液的质量检测标准是什么?

细胞培养液的质量检测标准是什么?

细胞培养液的质量检测标准核心是 “无菌安全 + 性能适配 + 批次稳定”，不同类型(含血清 / 无血清、科研 / 制药用)培养液会有细分要求，以下是通用核心标准及专项标准：

一、通用核心检测标准(适用于所有细胞培养液)

1. 外观与物理性质

外观：澄清透明液体，无浑浊、无沉淀、无絮状物，颜色符合配方要求(如 DMEM 呈桃红色、RPMI-1640 呈琥珀色)。

pH 值：哺乳动物细胞培养液为 7.2-7.4(用精密 pH 计检测，误差≤±0.1);特殊细胞(如昆虫细胞)可适配 6.2-6.8.

渗透压：280-320 mOsm/kg(用冰点渗透压仪检测，偏差≤±10 mOsm/kg)，避免渗透压异常导致细胞破裂或皱缩。

不溶性微粒：≥10 μm 微粒数≤10 个 /mL，≥25 μm 微粒数≤2 个 /mL(激光粒度仪检测，符合 USP 788 标准)。

2. 无菌性与微生物污染控制

无菌检查：接种胰酪大豆胨培养基(TSA/TSB)，30-35℃培养 14 天;同时接种沙氏葡萄糖培养基，20-25℃培养 14 天，均无细菌、真菌生长。

支原体检测：采用 PCR 法或培养法，结果为阴性(PCR 法检测支原体保守基因，无特异性条带;培养法无支原体菌落生长)，是细胞培养的必检项目。

内毒素：≤5 EU/mL(鲎试剂凝胶法或动态浊度法检测)，制药用培养液需≤2 EU/mL，避免内毒素引发细胞炎症反应。

病毒检测(抽检)：含血清培养液需检测牛病毒性腹泻病毒(BVDV)、牛细小病毒(BPV)等，结果为阴性;人源细胞用培养液需排除乙肝、丙肝等病毒污染。

3. 成分有效性检测

营养成分浓度：葡萄糖(5.5-25 mM)、氨基酸(如谷氨酰胺 0.5-4 mM)、蛋白质(血清培养基总蛋白 30-50 mg/mL)等，偏差≤±10%(高效液相色谱 HPLC 检测)。

添加剂有效性：抗生素(如青霉素 100 U/mL、链霉素 100 μg/mL)需通过抑菌圈实验验证抑菌活性;缓冲剂(如 HEPES)浓度符合配方标注(偏差≤±5%)。

4. 细胞性能验证(核心功能指标)

细胞增殖率：接种标准细胞(如 HEK293、CHO、L929)，培养 48-72 小时后，增殖率≥90%(与对照合格培养液相比，CCK-8 或 MTT 法检测)。

细胞贴壁率(贴壁细胞用)：接种成纤维细胞或上皮细胞，培养 24 小时后贴壁率≥85%(显微镜计数贴壁细胞占比)。

细胞形态：培养期间细胞形态正常，无皱缩、凋亡、坏死等异常表现(显微镜下观察)。

批次一致性：3 个不同批次培养液同步进行细胞性能验证，增殖率、贴壁率差异≤10%。

二、不同类型培养液专项检测标准

1. 含血清培养液(如添加胎牛血清 FBS)

血清质量：FBS 来源合法，血红蛋白含量≤20 mg/dL，总蛋白 30-50 mg/mL，批次间血清效价差异≤15%。

血清污染控制：无牛源致病菌(如炭疽杆菌、布氏杆菌)，支原体、病毒检测均为阴性。

2. 无血清培养液

生长因子活性：重组生长因子(如 EGF、胰岛素)纯度≥95%(SDS-PAGE 检测)，生物活性符合配方要求(如 EGF 促细胞增殖 EC₅₀值在规定范围)。

蛋白含量：总蛋白含量≤10 mg/mL(避免过多杂蛋白影响细胞功能)，白蛋白纯度≥90%(若添加)。

3. 制药用培养液(用于生物药生产，如 CHO 细胞表达单抗)

合规性：符合 GMP 要求，通过 ISO 13485 认证，可提供完整的质量追溯报告(CoA)。

外源因子控制：无动物源成分(或明确动物源成分来源)，重金属(铅、汞等)含量≤0.1 μg/mL，残留溶剂符合 ICH Q3C 标准。

稳定性：加速稳定性实验(37℃放置 14 天)后，细胞增殖率仍≥80%;实时稳定性实验验证有效期内性能达标。

4. 干细胞专用培养液

干细胞维持能力：培养干细胞(如间充质干细胞 MSC)7 天后，干细胞标志物(如 CD44、CD90)阳性率≥95%，无明显分化。

分化抑制能力：培养期间干细胞分化率≤5%(流式细胞术或分化标志物检测)。

三、质量放行标准

所有检测项目需符合上述指标要求，生成每批次质量检测报告(CoA)，明确批号、检测项目、标准值、实测值及合格判定，经质量部门审核通过后方可放行。