细胞培养液的无菌检测标准是什么?

细胞培养液的无菌检测标准是什么?

细胞培养液无菌检测的核心标准是 “无细菌、真菌等微生物生长”，需遵循标准化检测流程和结果判定规则，不同应用场景(科研 / 制药)略有差异。

一、检测依据与核心原则

通用依据：参考《中华人民共和国药典》(ChP)、美国药典(USP)、欧洲药典(EP)中 “无菌检查法” 标准。

核心原则：采用 “薄膜过滤法”(首选)或 “直接接种法”，通过培养验证是否存在活菌，检测过程需严格遵循无菌操作，避免外源性污染。

二、检测方法与操作标准

1. 薄膜过滤法(适用于大部分细胞培养液，灵敏度更高)

滤膜选择：用孔径 0.45 μm、直径 50 mm 的混合纤维素酯或聚醚砜(PES)滤膜，提前 121℃灭菌 15 分钟。

样品处理：取供试品 10~20 mL，通过无菌滤膜负压过滤，用无菌注射用水(或 pH 7.0 无菌氯化钠 - 蛋白胨缓冲液)冲洗滤膜 3 次，每次 10~20 mL(去除培养液中抗生素等抑菌成分)。

培养条件：将滤膜正面朝上分别接种至两种培养基 ——

① 胰酪大豆胨培养基(TSA/TSB)：30~35℃培养 14 天(检测细菌);

② 沙氏葡萄糖培养基(SDA)：20~25℃培养 14 天(检测真菌)。

2. 直接接种法(适用于无法过滤的黏稠培养液)

样品接种：取供试品 2 mL，分别接种至 10 mL 胰酪大豆胨培养基和 10 mL 沙氏葡萄糖培养基中。

培养条件：同薄膜过滤法，分别在 30~35℃(14 天)、20~25℃(14 天)下培养。

三、对照设置标准(避免假阴性 / 假阳性)

阳性对照：取金黄色葡萄球菌菌液(10~100 CFU)接种至胰酪大豆胨培养基，白色念珠菌菌液(10~100 CFU)接种至沙氏葡萄糖培养基，同条件培养，需出现明显菌生长(验证培养体系有效)。

阴性对照：取等量无菌注射用水，按样品检测流程操作，培养后无微生物生长(验证检测环境、耗材无菌)。

四、结果判定标准

合格标准：供试品接种的两种培养基，经 14 天培养后，无细菌、真菌菌落生长，且阳性对照有菌生长、阴性对照无菌生长，判定为无菌合格。

不合格标准：供试品培养基中出现任何微生物菌落(如 TSA 中出现浑浊、菌落，SDA 中出现菌丝、孢子)，判定为无菌不合格。

五、专项场景补充标准

科研用培养液：可简化培养周期至 7 天(需验证简化方法的可靠性)，核心是无可见微生物污染。

制药用培养液(如 CHO 细胞表达单抗用)：需严格遵循 GMP 要求，采用无菌检查法全项检测，同时配合支原体、内毒素检测，检测结果需纳入批记录，作为放行依据。