细胞培养液无菌检测的准备阶段，如何设置空白对照?

细胞培养液无菌检测的准备阶段，如何设置空白对照?

细胞培养液无菌检测准备阶段的空白对照，核心作用是单独验证检测用培养基本身无微生物污染，避免因培养基本身带菌导致样品结果误判，设置需遵循 “同批次、同条件、无额外干预” 原则，具体操作步骤、规范及注意事项如下：

1、空白对照的核心定义与设置目的

空白对照即未接种任何样品、菌液及替代物的空白培养基，仅通过与检测样品同步培养，验证培养基在生产、灭菌、分装等环节是否存在污染。若空白对照出现微生物生长，说明培养基本身不合格，本次所有样品检测结果均无效。

2、空白对照设置的详细操作步骤

培养基选型与批次匹配

必须选用与检测样品完全同批次的培养基，包括细菌检测用的胰酪大豆胨培养基(TSA/TSB)和真菌检测用的沙氏葡萄糖培养基(SDA)，避免不同批次培养基的质量差异干扰结果。

优先使用商业化无菌培养基(需提供 CoA 报告，明确无菌合格);若为自制培养基，需经 121℃高压灭菌 15 分钟，灭菌后观察外观(澄清无浑浊、无沉淀)。

空白培养基的制备与标记

直接取用未开封的同批次培养基，或在百级生物安全柜内，用无菌操作分装同批次培养基至无菌培养瓶(与样品用培养瓶规格一致，如 50mL / 瓶)。

清晰标注对照信息，标签需包含 “空白对照 + 培养基类型 + 样品批次 + 日期 + 操作者”，例如 “空白对照 - TSA - 培养液批次 2025001-XXX”，避免与样品、阳性 / 阴性对照混淆。

数量设置与培养安排

每批次检测至少设置 2 份空白对照，分别对应细菌和真菌检测(1 份 TSA/TSB+1 份 SDA);若检测样品数量较多(超过 20 份)，可增加至 3 - 5 份，提高验证可靠性。

空白对照需与检测样品、阳性对照、阴性对照同步放入同一培养箱，遵循相同培养条件：TSA/TSB 培养基 30 - 35℃培养 14 天，SDA 培养基 20 - 25℃培养 14 天，不可单独培养或更改温度、时间。

3、空白对照设置的关键规范

全程无菌操作，避免二次污染

制备空白对照时，需在已消毒的百级生物安全柜内进行，操作人员穿戴完整无菌装备(无菌服、手套、口罩、帽子)，手套用 75% 酒精擦拭消毒。分装过程中，培养瓶瓶口仅短暂开启，避免长时间暴露在空气中。

耗材独立，不与其他对照共用

空白对照使用的培养瓶、分装工具(如移液管)需为独立灭菌的新耗材，不可与样品、阳性对照共用，防止交叉污染导致结果失真。

不添加任何额外成分

空白对照仅为纯培养基，严禁加入无菌缓冲液、酒精等任何试剂，也不可接种样品或菌液，确保验证对象仅为培养基本身。

4、空白对照的有效性判定标准

培养 14 天后，空白对照需满足培养基澄清透明、无浑浊、无菌落生长、无菌丝或沉淀，即为合格。若出现以下情况，需及时处理：

若空白对照污染(出现浑浊、菌落等)，立即判定本次检测无效，更换同批次新培养基，重新制备空白对照及所有样品、对照，排查培养基灭菌不彻底或分装污染的原因。

若空白对照合格，但样品或其他对照出现异常，可排除培养基本身问题，聚焦排查样品污染、操作失误等其他因素。