细胞培养液无菌检测的准备阶段，如何设置阳性对照?

细胞培养液无菌检测的准备阶段，如何设置阳性对照?

细胞培养液无菌检测准备阶段，阳性对照和阴性对照是验证检测体系有效性、排除外源性污染的核心，二者需遵循 “同步操作、独立设置、标准规范” 原则，具体设置方法按步骤拆解如下，兼顾操作性与合规性：

阳性对照设置(验证培养体系能有效检出微生物):

阳性对照的核心是用标准菌株验证培养基、培养条件可支持微生物生长，避免因抑菌成分、培养基失效导致假阴性，步骤如下：

1、核心材料准备

标准菌株：选用符合 ChP/USP 标准的权威菌株，细菌用金黄色葡萄球菌（ATCC 6538），真菌用白色念珠菌（ATCC 10231），确保菌株来源合规、活性稳定。

菌液制备：将菌株接种至 TSA/SDA 培养基活化(37℃培养 24 小时)，制成 10⁶~10⁷ CFU/mL 的工作菌液，分装后 - 80℃冻存;使用前冰上解冻，稀释至10~100 CFU / 份(通过平板计数法校准浓度，避免浓度过高污染或过低无法生长)。

培养基：与检测样品完全同批次的胰酪大豆胨培养基(TSA/TSB，用于细菌)和沙氏葡萄糖培养基(SDA，用于真菌)。

2、具体操作步骤

取样与处理：取 0.1~0.2 mL 校准后的菌液，按样品检测方法完全复刻操作 —— 薄膜过滤法需同步过滤、用无菌缓冲液冲洗 3~5 次;直接接种法需注入对应培养基并混匀。

清晰标记：标签注明 “阳性对照 + 菌株类型 + 检测方法 + 样品批次 + 日期”，例：“阳性对照 - 金黄色葡萄球菌 - 薄膜过滤 - 培养液 2025001-XXX”。

培养安排：与样品、阴性对照同步放入培养箱，细菌 30~35℃培养 14 天，真菌 20~25℃培养 14 天，不可单独调整条件。

3、关键规范

分区操作：在生物安全柜内单独划分阳性对照区域，待阴性对照、样品处理完后再操作，避免菌液污染其他样品。

耗材独立：接种用移液管、滤膜、培养瓶需专用，不可与样品共用，操作后立即密封培养瓶。