选择适合的细胞培养类试剂第二步

选择适合的细胞培养类试剂第二步

选择适合的细胞培养类试剂第二步：核心试剂筛选(按类别精准匹配，避坑关键)

1. 培养基：基础配方决定细胞存活

选型逻辑：优先参考 ATCC、DSMZ 等权威数据库推荐(如 ATCC 推荐 HEK293 用 DMEM+10% FBS)，再按细胞类型调整：

常规细胞系(HeLa、A549)：选通用基础培养基(高糖 DMEM、RPMI-1640)，性价比高;

贴壁细胞(MSC、HUVEC)：选含贴壁因子的培养基(如 α-MEM、内皮细胞专用培养基)，或在基础培养基中添加纤连蛋白;

悬浮细胞(淋巴细胞、杂交瘤细胞)：选低黏附配方(如 RPMI-1640、IMDM)，避免血清过多导致聚团;

干细胞 / 原代细胞：选专用培养基(如 MSC 无血清专用培养基、神经元专用 Neurobasal 培养基)，含特定生长因子(如 bFGF、EGF);

特殊需求：无血清培养选重组生长因子替代血清的配方(如 CHO-S 专用无血清培养基);代谢敏感细胞(如胰岛 β 细胞)选低糖培养基(5.5 mM 葡萄糖)。

质控重点：pH 7.2-7.4、渗透压 280-320 mOsm/kg，无菌 / 支原体阴性，内毒素≤5 EU/mL(科研用)/≤2 EU/mL(生产用)。

2. 血清：细胞 “营养补充剂”，质量决定增殖效率

选型逻辑：优先选胎牛血清(FBS)，其次新生牛血清(性价比高)，特殊场景选无血清替代物：

科研常规实验：选合格级 FBS(内毒素<10 EU/mL、血红蛋白<20 mg/dL)，品牌如 Gibco、HyClone;

原代细胞 / 难培养细胞：选优级 FBS(内毒素<5 EU/mL、支原体阴性)，血源优先澳洲 / 南美(疫区血源需规避);

无血清需求：选重组蛋白替代血清的添加剂(如胰岛素、转铁蛋白)，或商业化无血清替代物(如 KnockOut Serum Replacement)。

避坑要点：

必须验证批次一致性：同一实验锁定同一批次，避免血清批次差异导致细胞生长波动;

避免反复冻融：血清解冻后分装入 50 mL 无菌管，-20℃冻存，使用时 4℃解冻。

3. 消化试剂：温和高效，保护细胞活性

选型逻辑：按细胞贴壁强度选择：

常规贴壁细胞(HeLa、HepG2)：胰蛋白酶 - EDTA(0.25%)，消化快速(2-5 分钟);

敏感细胞(干细胞、原代细胞)：选温和消化试剂(如 0.05% 胰酶、胶原酶 Ⅳ)，避免 EDTA 损伤细胞;

特殊细胞(如上皮细胞)：用胰酶 + Dispase 混合消化液，提高消化效率且保护细胞完整性。

质控重点：消化后细胞存活率≥95%，无细菌污染，酶活性稳定(可通过预实验验证消化时间)。

4. 添加剂：按需补充，优化培养体系

双抗（青霉素 - 链霉素）：常规培养添加(100 U/mL 青霉素 + 100 μg/mL 链霉素)，防控细菌污染;长期培养或功能实验(如细胞凋亡)建议不加，避免抗生素对细胞功能的干扰。

生长因子：干细胞 / 原代细胞需添加(如 MSC 需 bFGF、神经元需 NGF)，优先选重组生长因子(纯度高、活性稳定)，浓度按说明书推荐(如 EGF 10 ng/mL)。

谷氨酰胺：选稳定型谷氨酰胺(如 GlutaMAX)，避免常规谷氨酰胺降解产生氨毒损伤细胞。

缓冲剂：pH 敏感细胞(如巨噬细胞)添加 HEPES(5-10 mM)，维持培养体系 pH 稳定。